18．采用组织分离法培育菌种要经过哪些步骤？

蘑菇、香菇、平菇、金针菇、猴头菇、竹荪等栽培食用菌，以及松乳菇、松茸等纯化中的食用菌，均可采用组织分离法获得菌种。现以香菇为例说明组织分离法的主要步骤。

(1)选择种菇。按上述标准挑选种菇，采收后装入无菌纸袋内(忌用塑料袋)。

(2)组织分离。在无菌条件下，先用酒精棉球对菇体进行表面消毒，然后手持菌柄，将香菇撕成两半，取手术刀经火焰灭菌、冷却后，在菌盖、菌柄交界处挑取一小块(米粒般大小)菌肉，移植到P D A斜面上(事先配制并灭菌备用)，即可转入培养观察阶段。

(3)培养观察。上述组织分离物在25℃条件下，经过3～5天即可看到分离物表面长出白色绒毛状菌丝，呈星芒状在培养基上生长。培养期间，应每隔1～2天检查1次，随时淘汰真菌或细菌污染的培养物。培养10～15天后，再做1次转管培养，即可得到香菇母种。然后经栽培试验，确认其可以正常出菇后方可用于菌种生产和栽培。