第四节　标记抗体技术

一、概念

抗原与抗体能特异性结合，但抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原抗体复合物是不可见的。有一些物质即使在超微量时也能通过特殊的方法将其检测出来，如果将这些物质标记在抗体分子上，则可以通过检测标记分子来显示抗原抗体复合物的存在，此种根据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感性建立的技术，称为标记抗体技术。高敏感性的标记分子主要有荧光素、酶、放射性同位素三种，由此建立免疫荧光抗体技术、免疫酶标记技术和放射免疫分析，其特异性和敏感性远远超过常规血清学方法，已广泛应用于病原微生物鉴定、动物疫病的诊断与血清流行病学检测与调查。

二、免疫荧光抗体技术

免疫荧光抗体技术是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然后用荧光显微镜观察荧光以分析示踪相应的抗原或抗体的方法，是将抗原抗体反应的特异性、荧光检测的高敏感性以及显微镜技术的精确性三者相结合的一种免疫检测技术。

（一）荧光抗体染色方法

（二）免疫荧光抗体技术的使用

三、免疫酶标记技术

根据抗原抗体反应的特异性和酶催化反应的高敏感性而建立起来的免疫检测技术。酶是一种有机催化剂，催化反应过程中酶能反复作用，微量的酶即可导致大量的催化过程。常用的有辣根过氧化酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以辣根过氧化物酶应用最广。免疫酶标记技术可用以在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、纳克水平上测定它们的量，既特异又敏感，是目前应用最为广泛的免疫检测方法之一。

常用的免疫酶标记技术

四、放射免疫分析

放射免疫分析（RIA）是将放射性同位素测量的高度敏感性和抗原抗体反应的高度特异性结合起来而建立的一种免疫分析技术。

RIA具有特异性强、灵敏度高、准确性和精密度好等优点，是目前其他分析方法所无法比拟的而且操作简便，便于标准化，其灵敏度可达纳克（ng）至皮克（pg）级水平，比一般分析方法提高了1000～1000000倍。