皮损组织液，淋巴结和妊娠妇女羊水穿刺液以及病理组织印片等样本适合于梅毒螺旋体DFA检测。

适用于一期梅毒硬下疳和二期梅毒疹、扁平湿疣等，用棉拭子将皮损部位污物擦去，如有痂皮，可用钝刀除去，用手挤压皮损周围，使组织液渗出，用钝刀或盖玻片轻轻地刮取组织液（避免出血），将渗出组织液制成涂片。

消毒淋巴结表面皮肤，用注射器以无菌操作穿刺淋巴结并注入无菌生理盐水，再吸入注射器内，如此反复二三次，将抽取的淋巴液直接滴在玻片上制成涂片。

梅毒妊娠妇女的羊膜穿刺术应由专业人员操作，获得羊水直接滴在玻片上制成涂片。如果样本充足，注入无菌试管中送检。

由专业人员采用腰椎穿刺术获得脑脊液，注入无菌试管中送检。

取可疑病损部位行组织切片，轻轻挤压切口面将渗出的组织液印在玻片上。

样本采集后应尽快送检，如果实验室较远不能及时送检，可将溃疡渗出液涂片或组织压片制备后于空气干燥，4～8℃可储存1个月，−20℃可储存数月到数年。运输时使用硬纸盒或泡沫聚苯乙烯盒包裹，以防止玻片破裂。或直接将体液样本放入密闭的容器中，再装入密闭的塑料袋中运输到实验室。

将渗出组织液均匀地涂布于玻片上，空气中自然干燥，干燥后用丙酮固定5～10分钟。

将抽取的淋巴液直接滴在玻片上，均匀地涂布制成涂片，空气中自然干燥，干燥后用丙酮固定5～10分钟。

将羊水离心（1500g×30分钟）沉淀梅毒螺旋体，小心去除上清液，将沉淀物混匀后均匀涂片，空气中自然干燥，干燥后用丙酮固定5～10分钟。

如果样本量少，将脑脊液直接滴在玻片上制成涂片。如果样本充足，可采取离心（1500g×30分钟）沉淀梅毒螺旋体，小心去除上清液，将沉淀物混匀后均匀涂片，空气中自然干燥，干燥后用丙酮固定5～10分钟。

将未经固定的新鲜组织小块压印玻片上，空气中自然干燥，干燥后用丙酮固定5～10分钟。

切片后，应进行脱蜡后才能用于直接免疫荧光染色。